臨床生物化學(xué)/層析法實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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（一）凝膠層析法
凝膠層析又稱(chēng)分子篩過(guò)濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點(diǎn)是層析所用的凝膠屬于惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行，不需要有機(jī)溶劑，并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。對(duì)于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。
⒈凝膠的選擇根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同型號(hào)的凝膠。如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍悠分械拇蠓肿游镔|(zhì)和小分子物質(zhì)分開(kāi)，由于它們?cè)诜峙湎禂?shù)上有顯著差異，這種分離又稱(chēng)組別分離，一般可選用Sephadex G-25和G-50，對(duì)于小肽和低分子量的物質(zhì)（1000-5000）的脫鹽可使用Sephadex G-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4。如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍悠分幸恍?a href="/w/%E5%88%86%E5%AD%90%E9%87%8F" title="分子量">分子量比較近似的物質(zhì)進(jìn)行分離，這種分離又叫分級(jí)分離。一般選用排阻限度略大于樣品中最高分子量物質(zhì)的凝膠，層析過(guò)程中這些物質(zhì)都能不同程度地深入到凝膠內(nèi)部，由于Kd不同，最后得到分離。
⒉柱的直徑與長(zhǎng)度根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，組別分離時(shí)，大多采用2-30cm長(zhǎng)的層析柱，分級(jí)分離時(shí)，一般需要100cm左右長(zhǎng)的層析柱，其直徑在1-5cm范圍內(nèi)，小于1cm產(chǎn)生管壁效應(yīng)，大于5cm則稀釋現(xiàn)象嚴(yán)重。長(zhǎng)度L與直徑D的比值L/D一般宜在7-10之間，但對(duì)移動(dòng)慢的物質(zhì)宜在30-40之間。
⒊凝膠柱的制備凝膠型號(hào)選定后，將干膠顆粒懸浮于5-10倍量的蒸餾水或洗脫液中充分溶脹，溶脹之后將極細(xì)的小顆粒傾瀉出去。自然溶脹費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，加熱可使溶脹加速，即在沸水浴中將濕凝膠漿逐漸升溫至近沸，1-2小時(shí)即可達(dá)到凝膠的充分脹溶。加熱法既可節(jié)省時(shí)間又可消毒。
凝膠的裝填：將層析柱與地面垂直固定在架子上，下端流出口用夾子夾緊，柱頂可安裝一個(gè)帶有攪拌裝置的較大容器，柱內(nèi)充滿(mǎn)洗脫液，將凝膠調(diào)成較稀薄的漿頭液盛于柱頂?shù)娜萜髦校缓笤谖⑽⒌財(cái)嚢柘率鼓z下沉于柱內(nèi)，這樣凝膠粒水平上升，直到所需高度為止，拆除柱頂裝置，用相應(yīng)的濾紙片輕輕蓋在凝膠床表面。稍放置一段時(shí)間，再開(kāi)始流動(dòng)平衡，流速應(yīng)低于層析時(shí)所需的流速。在平衡過(guò)程中逐漸增加到層析的流速，千萬(wàn)不能超過(guò)最終流速。平衡凝膠床過(guò)夜，使用前要檢查層析床是否均勻，有無(wú)“紋路”或氣泡，或加一些有色物質(zhì)來(lái)觀察色帶的移動(dòng)，如帶狹窄、均勻平整說(shuō)明層析柱的性能良好，色帶出現(xiàn)歪曲、散亂、變寬時(shí)必須重新裝柱。
⒋加樣和洗脫凝膠床經(jīng)過(guò)平衡后，在床頂部留下數(shù)亳升洗脫液使凝膠床飽和，再用滴管加入樣品。一般樣品體積不大于凝膠總床體積的5％-10％。樣品濃度與分配系數(shù)無(wú)關(guān)，故樣品濃度可以提高，但分子量較大的物質(zhì)，溶液的粘度將隨濃度增加而增大，使分子運(yùn)動(dòng)受限，故樣品與洗脫液的相對(duì)粘度不得超過(guò)1.5-2。樣品加入后打開(kāi)流出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，當(dāng)樣品液面恰與凝膠床表面相平時(shí)，再加入數(shù)毫升洗脫液中洗管壁，使其全部進(jìn)入凝膠床后，將層析床與洗脫液貯瓶及收集器相連，預(yù)先設(shè)計(jì)好流速，然后分部收集洗脫液，并對(duì)每一餾份做定性、定量測(cè)定。
⒌凝膠柱的重復(fù)使用、凝膠回收與保存一次裝柱后可以反復(fù)使用，不必特殊處理，并不影響分離效果。為了防止凝膠染菌，可在一次層析后加入0.02％的疊氮鈉，在下次層析前應(yīng)將抑菌劑除去，以免干擾洗脫液的測(cè)定。
如果不再使用可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，依次用70％、90％、95％乙醇脫水平衡至乙醇濃度達(dá)90％以上，濾干，再用乙醚洗去乙醇、濾干、干燥保存。濕態(tài)保存方法是凝膠漿中加入抑菌劑或水沖洗到中性，密封后高壓滅菌保存。
⒍凝膠層析的應(yīng)用
⑴脫鹽：高分子（如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等）溶液中的低分子量雜質(zhì)，可以用凝膠層析法除去，這一操作稱(chēng)為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速、蛋白質(zhì)和酶類(lèi)等在脫鹽過(guò)程中不易變性。適用的凝膠為SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6。柱長(zhǎng)與直徑之比為5-15，樣品體積可達(dá)柱床體積的25％-30％，為了防止蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度降低會(huì)形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類(lèi)緩沖液使層析柱平衡，然后加入樣品，再用同樣緩沖液洗脫，收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發(fā)性鹽類(lèi)。
⑵用于分離提純：凝膠層析法已廣泛用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質(zhì)的分離提純。凝膠對(duì)熱原有較強(qiáng)的吸附力，可用來(lái)去除無(wú)離子水中的致熱原制備注射用水。
⑶測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量：用一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品放入同一凝膠柱內(nèi)，在同一條件下層析，記錄每一分鐘成分的洗脫體積，并以洗脫體積對(duì)分子量的對(duì)數(shù)作圖，在一定分子量范圍內(nèi)可得一直線，即分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定未知物質(zhì)的分子量時(shí)，可將此樣品加在測(cè)定了標(biāo)準(zhǔn)曲線的凝膠柱內(nèi)洗腫后，根據(jù)物質(zhì)的洗脫體積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它的分子量。
⑷高分子溶液的濃縮：通常將SephadexG-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中，這時(shí)水分和低分子量的物質(zhì)就會(huì)進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部的孔隙中，而高分子物質(zhì)則排阻在凝膠顆粒之外，再經(jīng)離心或過(guò)濾，將溶脹的凝膠分離出去，就得到了濃縮的高分子溶液。
（二）離子交換層析法
離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。
⒈離子交換劑預(yù)處理和裝柱對(duì)于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對(duì)于已溶脹好的產(chǎn)品則不必經(jīng)這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用“堿-酸-堿”處理，使最終轉(zhuǎn)為-OH-型或鹽型交換劑；對(duì)于陽(yáng)離子交換劑則用“酸-堿-酸”處理，使最終轉(zhuǎn)為-H-型交換劑。洗滌好的纖維素使用前必須平衡至所需的pH和離子強(qiáng)度。已平衡的交換劑在裝柱前還要減壓除氣泡。為了避免顆粒大小不等的交換劑在自然沉降時(shí)分層，要適當(dāng)加壓裝柱，同時(shí)使柱床壓緊，減少死體積，有利于分辨率的提高。柱子裝好后再用起始緩沖液淋洗，直至達(dá)到充分平衡方可使用。
⒉加樣與洗脫加樣：層析所用的樣品應(yīng)與起始緩沖液有相同的pH和離子強(qiáng)度，所選定的pH值應(yīng)落在交換劑與被結(jié)合物有相反電荷的范圍，同時(shí)要注意離子強(qiáng)度應(yīng)低，可用透析、凝膠過(guò)濾或稀釋法達(dá)此目的。樣品中的不溶物應(yīng)在透析后或凝膠過(guò)濾前，以離心法除去。為了達(dá)到滿(mǎn)意的分離效果，上樣量要適當(dāng)，不要超過(guò)柱的負(fù)荷能力。柱的負(fù)荷能力可用交換容量來(lái)推算，通常上樣量為交換劑交換總量的1％-5％。
洗脫：已結(jié)合樣品的離子交換前，可通過(guò)改變?nèi)芤旱膒H或改變離子強(qiáng)度的方法將結(jié)合物洗脫，也可同時(shí)改變pH與離子強(qiáng)度。為了使復(fù)雜的組份分離完全，往往需要逐步改變pH或離子強(qiáng)度，其中最簡(jiǎn)單的方法是階段洗脫法，即分次將不同pH與離子強(qiáng)度的溶液加入，使不同成分逐步洗脫。由于這種洗脫pH與離子強(qiáng)度的變化大，使許多洗脫體積相近的成分同時(shí)洗脫，純度較差，不適宜精細(xì)的分離。最好的洗脫方法是連續(xù)梯度洗脫，洗脫裝置見(jiàn)圖16-6。兩個(gè)容器放于同一水平上，第一個(gè)容器盛有一定pH的緩沖液，第二個(gè)容器含有高鹽濃度或不同pH的緩沖液，兩容器連通，第一個(gè)容器與柱相連，當(dāng)溶液由第一容器流入柱時(shí)，第二容器中的溶液就會(huì)自動(dòng)來(lái)補(bǔ)充，經(jīng)攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。第一容器中任何時(shí)間的濃度都可用下式進(jìn)行計(jì)算：
C＝C2－（C2－C1）（1－V）A2/A1
式中A1、A2分別代表兩容器的截面積：C1、C2分別表示容器中溶液的濃度；V為流出體積對(duì)總體積之比。當(dāng)A1＝A2時(shí)為線性梯度，當(dāng)A1＞A2時(shí)為凹形梯度，A1＞A2時(shí)為凸形梯度。
洗脫時(shí)應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：①洗脫液體積應(yīng)足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不致于太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質(zhì)能被洗脫下來(lái)。③梯度不要上升太快，要恰好使移動(dòng)的區(qū)帶在快到柱末端時(shí)達(dá)到解吸狀態(tài)。目的物的過(guò)早解吸，會(huì)引起區(qū)帶擴(kuò)散；而目的物的過(guò)晚解吸會(huì)使峰形過(guò)寬。
圖16-6 梯度洗脫示意圖
⒊洗脫餾份的分析 按一定體積（5-10ml/管）收集的洗脫液可逐管進(jìn)行測(cè)定，得到層析圖譜。依實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌刹捎眠m宜的檢測(cè)方法（生物活性測(cè)定、免疫學(xué)測(cè)定等）確定圖譜中目的物的位置，并回收目的物。
⒋離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/:NaCl淋洗柱，若有強(qiáng)吸附物則可用0.1mol/l NaOH洗柱；若有脂溶性物質(zhì)則可用非離子型去污劑洗柱后再生，也可用乙醇洗滌，其順序?yàn)椋?.5mol/l NaOH-水-乙醇-水-20％NaOH-水。保存離子交換劑時(shí)要加防腐劑。對(duì)陰離子交換劑宜用0.002％氯已定（洗必泰），陽(yáng)離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005％）。有些產(chǎn)品建立用0.02％疊氮鈉。
⒌離子交換層析的應(yīng)用離子交換層析技術(shù)已廣泛用于各學(xué)科領(lǐng)域。在生物化學(xué)及臨床生化檢驗(yàn)中主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。
（三）高效液相層析法
高效液相層析法（HPLC）是近二十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。它是在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進(jìn)了氣相層析的理論具有氣相層析的全部?jī)?yōu)點(diǎn)。由于HPLC分離能力強(qiáng)、測(cè)定靈敏度高，可在室溫下進(jìn)行，應(yīng)用范圍極廣，無(wú)論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩(wěn)定還是不穩(wěn)定的化合物均可用此法測(cè)定。對(duì)蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類(lèi)固醇和類(lèi)脂等尤為有利。
高效液相層析法的基本概念和分離理論與經(jīng)典的液相色譜法及氣相色譜法一致，因而其塔板理論及動(dòng)力學(xué)理論等都可用于高效液相層析。
⒈高效液相層析儀典型的高效液相層析儀包括輸液系統(tǒng)、層析柱與檢測(cè)系統(tǒng)三部分。流動(dòng)相用一高壓泵輸入。這種高壓泵應(yīng)滿(mǎn)足以下條件：①流量恒定，無(wú)脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍。②能抗溶劑腐蝕。③有較高的輸出壓力，一般要達(dá)到15～300kg/c，也有的高達(dá)800kg/c。④泵的死體積要小。梯度洗脫裝置必須具備兩臺(tái)高壓泵，一臺(tái)輸送強(qiáng)溶劑，一臺(tái)輸送弱溶劑，兩泵運(yùn)轉(zhuǎn)速度用電腦控制，并可按一定的要求改變流動(dòng)相的組成，以改善分離效果。一般用微量注射器直接進(jìn)樣，也可采用六通閥門(mén)進(jìn)樣。HPLC中所用的檢測(cè)器最多應(yīng)用的是紫外吸收檢測(cè)，靈敏度可達(dá)ng水平。此外，還有熒光檢測(cè)器、示差析光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器等。
⒉HPLC的類(lèi)型與應(yīng)用
⑴液-固吸附層析：固定相是具有吸附活性的吸附劑，常用的有硅膠、氧化鋁、高分子有機(jī)酸或聚酰胺凝膠等。液-固吸附層析中的流動(dòng)相依其所起的作用不同，分為“底劑”和洗脫劑兩類(lèi)，底劑起決定基本色譜的分離作用，洗脫劑起調(diào)節(jié)試樣組份的滯留時(shí)間長(zhǎng)短，并對(duì)試樣中某幾個(gè)組份具有選擇性作用。流動(dòng)相中底劑與洗脫劑成分的組合和選擇，直接影響色譜的分離情況，一般底劑為極性較低的溶劑，如正已烷、環(huán)已烷、戊烷、石油醚等，洗脫劑則根據(jù)試樣性質(zhì)選用針對(duì)性溶劑，如醚、酯、酮、醇和酸等。本法可用于分離異構(gòu)體、抗氧化劑與維生素等。
⑵液-液分配層析：固定相為單體固定液構(gòu)成。將固定液的官能團(tuán)結(jié)合在薄殼或多孔型硅膠上，經(jīng)酸洗、中和、干燥活化、使表面保持一定的硅羥基。這種以化學(xué)鍵合相為固定相的液-液層析稱(chēng)為化學(xué)鍵合相層析。另一種利用離子對(duì)原理的液-液分配層析為離子對(duì)層析。化學(xué)鍵合層析分：①極性鍵合相層析：固定相為極性基團(tuán)，氰基、氨基及雙羥基三種。流動(dòng)相為非極性或極性較小的溶劑。極性小的組份先出峰，極性大的后出峰，這稱(chēng)為正相層析法，適用于分離極性化合物。②非極性鍵合相層析：固定相為非極性基團(tuán)，如十八烷基（C18）、辛烷基（C8）、甲基與苯基等，流動(dòng)相用強(qiáng)極性溶劑，如水、醇、乙腈或無(wú)機(jī)鹽緩沖液。最常用的是不同比例的水和甲醇配制的混合溶劑，水不僅起洗脫作用還可掩蓋載體表面的硅羥基，防止因吸附而至的拖尾現(xiàn)象。極性大的組份先出峰，極性小的組份后出峰，恰好與正相法相反，故稱(chēng)反相層析。本法適用于小分子物質(zhì)的分離，如肽、核苷酸、糖類(lèi)、氨基酸的衍生物等。離子對(duì)分配層析分：①正相離子對(duì)層析：此法常以水吸附在硅膠上作為固定相，把與分離組份帶相反電荷的配對(duì)離子以一定濃度溶于水或緩沖液涂漬在硅膠上。流動(dòng)相為極性較低的有機(jī)溶劑。在層析過(guò)程中，待分離的離子與水相中配對(duì)離子形成中性離子對(duì)，在水相和有機(jī)相中進(jìn)行分配，而達(dá)到分離。本法優(yōu)點(diǎn)是流動(dòng)相選擇余地大，缺點(diǎn)是固定相易流失。②反向離子對(duì)層析：固定相是疏水性鍵合硅膠，如C18鍵合相，待分離離子和帶相反電荷的配對(duì)離子同時(shí)存在于強(qiáng)極性的流動(dòng)相中，生成的中性離子對(duì)在流動(dòng)相和鍵合相之間進(jìn)行分配，而得到分離。本法優(yōu)點(diǎn)是固定相不存在流失問(wèn)題、流動(dòng)相含水或緩沖液更適用于電離性化合物的分離。
⑶離子交換層析：原理與普通離子交換相同。在離子交換HPLC中，固定相多用離子性鍵合相，故本法又稱(chēng)離子性鍵合相層析。流動(dòng)相主要是水溶液，pH值最好在被分離酸、堿的pK值附近。
（四）親和層析法
親和層析是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達(dá)到分離目的的一類(lèi)特殊層析技術(shù)。
具有專(zhuān)一親和力的生物分子對(duì)主要有：抗原與抗體、DNA與互補(bǔ)DNA或RNA、酶與它的底物或競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結(jié)合蛋白、糖蛋白與它相應(yīng)的植物凝集素等。可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當(dāng)含有混合組份的樣品通過(guò)此固定相時(shí)，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒(méi)有親和力的無(wú)關(guān)組份就隨流動(dòng)相流出，然后改變流動(dòng)組成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來(lái)。親和層析中所用的載體稱(chēng)為基質(zhì)，與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱(chēng)配基。
親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高。對(duì)分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。但本法必須針對(duì)某一分離對(duì)象，制備專(zhuān)一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件，因此親和層析的應(yīng)用范圍受到了一定的限制。
親和層析可用于純化生物大分子：稀溶液的濃縮；不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏；從純化的分子中除去殘余的污染物；用免疫吸附劑吸附純化對(duì)此尚無(wú)互補(bǔ)配體的生物大分子；分離核酸是親和層析應(yīng)用的一個(gè)重要方面。
應(yīng)用實(shí)例：2-胰凝乳蛋白酶的提純
⒈親和吸附劑（Σ-氨基-N-乙酰-D-色氨酸）的制備取一定體積的Sepharose4B加100mgCNBr。攪拌混合物，滴加2-8mol/l NaOH，使溶液pH維持在11.0。20℃左右，8-12分鐘完成反應(yīng)。在布氏漏斗中抽濾活化的瓊脂糖，然后用20倍體積冷的0.1mol/l NaHCO3（pH9.0）溶液洗滌。將上述活化的Sepharose4B與等體積0.1mol/l NaHCO3（pH9.0并在冰箱中預(yù)冷）溶液混合，接著迅速加入α-胰蛋白酶抑制劑（Σ-氨基-N-乙酰-色氨酸甲酯）。抑制劑的最大用量為每毫升Sepharose 4B 65μmol/L。4℃緩慢攪拌約24小時(shí)，而后再用水和緩沖液反復(fù)地洗至沒(méi)有游離的抑制劑為止。制得的親和吸附劑在50mmol/l Tris-HCl緩沖液（pH8.0）中保存?zhèn)溆谩?/p>
⒉分離 親和吸附劑裝柱后用50mmol/LTris-HCl（pH8.0）緩沖液平衡（室溫）。樣品溶于同樣緩沖液中并上柱，再應(yīng)用同樣緩沖液淋洗柱子。流速為30-60ml/小時(shí)，直至280nm無(wú)光吸收時(shí)停止洗滌，然后改用0.2mol/L醋酸緩沖液（pH3.0）洗脫。
（五）聚焦層析法
聚焦層析是一種操作簡(jiǎn)單、廉價(jià)的層析技術(shù)。它的原理是根據(jù)各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離的過(guò)程，因此本方法具有高分辨、高度濃縮和高度專(zhuān)一等特點(diǎn)。聚焦層析所用的凝膠首先用高pH溶液平衡，然后用多元緩沖液進(jìn)行洗脫，多元緩沖液pH呈梯度下降。
聚焦層析所用凝膠主要有兩種：MONOP和多元緩沖液交換劑（PBE）。其中MONOP是帶孔小珠，孔中被帶正電荷的胺基填充，適用于高效聚焦層析。多元緩沖液交換劑是一種交換凝膠，適用作普通聚焦層析的介質(zhì)。各種凝膠性質(zhì)見(jiàn)表16-8。
表16-8 聚焦層析技術(shù)數(shù)據(jù)
| 凝膠名稱(chēng) | pH范圍 | 洗脫 |
| MONOP | 11-8 | Pharmalyte 8-10.5 |
| PBE | 11-8 | Pharmalyte 8-10.5 |
| MONOP | 9-6 | 多元緩沖液96 |
| PBE 94 | 7-4 | 多元緩沖液74 |
| PBE94 | 7-4 | 多元緩沖液74 |
NONOP可制成兩種高效液相柱：MONOp HR5/5(1ml)，和MONOp HR5/20(5ml)。使用時(shí)根據(jù)樣品復(fù)雜性選擇相應(yīng)的柱。HR5/5分辨率為pI>0.2，HR5/20pI>0.02。
多元緩沖液交換劑PBE，屬珠狀交換劑凝膠，有PBe 118（pH11-8）和PBE（pH9-4）。在聚焦層析時(shí)，通過(guò)使用不同的洗脫液，可使交換容量發(fā)生改變，并且使pH達(dá)到更廣的范圍。
 層析技術(shù)的原理和分類(lèi) | 電化學(xué)分析技術(shù)的應(yīng)用  |
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