臨床生物化學/層析技術的原理和分類

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臨床生物化學

常用分析技術在臨床生物化學中的應用
- 層析技術的應用
  - 層析技術的原理和分類
  - 層析法實驗技術

（一）層析技術的原理

層析法是目前廣泛應用的一種分離技術。本世紀初俄國植物學家M.Tswett發現并使用這一技術證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素。現在層析法已成為生物化學、分子生物學及其它學科領域有效的分離分析工具之一。

層析法是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術。所有的層析系統都由兩個相組成：一是固定相，它或者是固體物質或者是固定于固體物質上的成分；另一是流動相，即可以流動的物質，如水和各種溶媒。當待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時，由于各組份的理化性質存在差異，與兩相發生相互作用（吸附、溶解、結合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨溶媒向前移動，各組份不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動相移動時受到的阻滯作用小，向前移動的速度快。反之，與固定相相互作用越強的組份，向前移動速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達到將各組份分離的目的。

（二）層析法分類見表16-5～7

（三）層析法的特點與應用

表16-5　按兩相所處狀態分類

		流動相
		液體	氣體
	液體	液-液層析法	氣-液層析法
固定相
	固體	液-固層析法	氣-固層析法

層析法是根據物質的理化性質不同而建立的分離分析方法。根據層析峰的位置及峰高或峰面積，可以定性及定量。層析法與光學、電學或電化學儀器連用，可檢測出層析后各組份的濃度或質量，同時繪出層析圖。層析儀與電子計算機聯用，可使操作及數據處理自動化，大大縮短分析時間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度高、選擇性好、速度快等特點，因此適用于雜質多、含量少的復雜樣品分析，尤其適用于生物樣品的分離分析。近年來，已成為生物化學及分子生物學常用的分析方法。在醫藥衛生、環境化學、高分子材料、石油化工等方面也得到了廣泛的應用。

表16-6　按層析原理分類

名稱	分離原理
吸附層析法	組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑，各能力不同
分配層析法	各組份在流動相和靜止液相（固相）中的分配系數不同
離子交換層析法	固定相是離子交換劑，各組份與離子交換劑親和力不同
凝膠層析法	固定相是多孔凝膠，各組份的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度不同
親和層析法	固定相只能與一種待分離組份專一結合，以此和無親和力的其它組份分離

表16-7　按操作形式不同分類

名稱	操作形式
柱層析法	固定相裝于柱內，使樣品沿著一個向前移而達分離
薄層層析法	將適當粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點樣后用流動相展開，使各組份分離
紙層析法	用濾紙作液體的載體，點樣后用流動相展開，使各組份分離
薄膜層析法	將適當的高分子有機吸附劑制成薄膜，以類似紙層析方法進行物質的分離