組織學/電子顯微鏡術
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1、透射電鏡術 透射電鏡（transmission electron microscope,TEM）是以電子束穿透樣品（組織的超薄切片），經聚合放大后，顯像于熒光屏上進行觀察和攝片的。電鏡的放大倍數的分辨率比光鏡大得多，放大倍數為幾萬至幾十萬倍，分辨率可達0.2nm。標本制備較光鏡的更嚴格，新鮮組織切成小塊（lmm3），用戊二醛，多聚甲醛、四氧化鋨等固定，樹脂包埋，以超薄切片機切成厚50～80nm的超薄切片，經醋酸鈾和檸檬酸鉛等重金屬電子染色后，置于電鏡下觀察，標本在熒光屏上呈黑白反差的結構影像。被重金屬浸染呈黑色的結構，稱電子密度高（electron-dense）；反之，淺染的部分稱電子密度低（electron-lucent）,這種染色稱正染色（positive staining）。若被染結構著色淺淡，而其周圍部分染成黑,是稱為負染色（negative stainning）。透射電鏡的電子槍加速電壓50～100kV，電子束穿透力低，近年制成加速電壓500kV以上的超高壓電鏡，電子束穿透力很強，可觀察0.5～10μm厚的切片，可觀察細胞內骨架等的立體超微結構。應用電鏡觀察細胞化學染色標本，稱電鏡細胞化學術（electron microscope cytochemistry）；電鏡觀察免疫細胞化學染色標本，稱免疫電鏡術（immunoelectron microscopy）；電鏡與放射自顯影結合的方法稱電鏡放射自顯影術（electron microscopeautoradiography）。
2、掃描電鏡術 掃描電鏡（scanning electron microscope,SEM）是用于觀察組織表面的立體結構的。組織塊經固定后，置于真空鍍膜儀內于燥，在標本表面先后噴鍍一層碳膜和合金膜，即可置于鏡下觀察。掃描電鏡的景深長，樣品表面的金屬膜可提高其導電性和圖像反差，在熒光屏上掃描成像，呈現富有立體感的表面圖像，如細胞表面的突起、微絨毛、纖毛及細胞的分泌與吞噬行為等（圖1－13）。
圖1－13大鼠分離肝巨噬細胞粘著吞噬羊紅細胞掃描電鏡像
M肝巨噬細胞，R羊紅細胞
圖1－14 冷凍蝕刻標本制備示意圖
圖1－15 細胞單位膜從中間層劈開示意圖
3、冷凍蝕刻復型術和冷凍割斷術
冷凍蝕刻復型術（tfeeze etch replica）：是在透射電鏡下觀察組織或細胞斷裂面的金屬復制膜，顯示細胞微細結構的立體影像。組織塊先經甘油生理鹽水處理（防止形成冰晶）后投入液氮快速冷凍，在低溫下用鋼刀將樣品劈開，形成凹凸不平的斷裂面：－100℃真空下使斷裂面的冰晶升華，暴露不平整表面；在斷裂面上先后噴鍍一層合金膜和碳膜，用次氯酸等組織腐蝕掉；將反差的凸凹不平的金屬復型膜置于鏡下觀察（圖1－14）。此項技術尤適用研究生物膜的內部結構，如從單位膜的脂質分子疏水端劈開（圖1－15），經蝕刻鍍膜，鏡下可見質膜斷裂面復型膜結構狀態（圖1－16），其凹凸影像恰與實物相反。
圖1-16小鼠腎近曲小管微絨毛冷凍蝕刻復型電鏡像 ×38300
MV微絨毛 E E面，P P面（白求恩醫科大學尹昕、朱秀雄教授供圖）
冷凍割斷術（freeze cracking）：是將固定組織包埋在樹脂內，低溫下割斷，斷面噴鍍合金，在掃描電鏡下觀察斷面的立體構型。該技術適于研究組織內部微細結構的相互關系，如肝細胞與肝血竇和膽小管的關系，腎小體的腎小囊與血管球的關系等（圖1－17）。
圖1－17 大鼠腎冷凍割斷掃描電鏡示腎小體
R腎小囊外表面，G血管球，T腎小管
（白求恩醫科大學尹昕、朱秀雄教授供圖）
4、電鏡X－射線顯微分析術X－射線顯微分析術（X-ray microanalysis）是研究細胞和組織內元素的種類、分布和含量的新技術。它是利用高速電子束轟擊電鏡內生物標本的微小區域，使該區所含的元素發射了一定波長的X－射線，通過檢測器對X－射線進行波譜或能譜分析，即可測定微區內元素的性質、含量和分布。如測定細胞內Na、K、Ca、Fe、P、Cl等及某些微量元素的含量和分布變化，探討各種元素與細胞生理和病理的關系。
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