A+醫學百科 >> 免疫細胞化學

是將免疫學基本原理與細胞化學技術相結合所建立起來的新技術，根據抗原與抗體特異性結合的特點，檢測細胞內某種多肽、蛋白質及膜表面抗原和受體等大分子物質的存在與分布。肽類與蛋白質種類繁多，均具有抗原性，當將人或動物的某種肽或蛋白質作為抗原注入另一種動物體內，則產生與該抗原相應的特異性抗體（免疫球蛋白）；將抗體從血清中提出后，結合上某種標記物，即成為標記抗體。用標記抗體與組織切片標本孵育，抗體則與細胞中相應抗原發生特異性結合，結合部位被標記物顯示，則在顯微鏡下觀察到該肽或蛋白質的分布。用熒光素（常用異硫氰酸）標記抗體，并于熒光顯微鏡下觀察，稱免疫熒光術。如抗體與辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase， HRP）等結合，進行酶顯示后，可在光鏡或電鏡觀察，用于電鏡者則稱為免疫電鏡術（immunoelectronmicroscopy)此外，以鐵蛋　標記抗體白標記抗體，稱鐵蛋白標記法,也能用于電鏡下觀察。　　

標記抗體與抗原結合方式

標記抗體與抗原結合方式主要有兩種：①直接法：用標記抗體與抗體中的相應抗原直接結合，操作方法簡便，特異性高，但敏感性較差，此法可用于檢定未知抗原；②間接法：先用未標記的具有特異性的第一抗體與樣品中的相應抗原結合，然后再以標記的第二抗體與特異性的第一抗體結合；第二抗體是用第一抗體作為抗原注入另一動物體內誘導產生的抗體，然后再結合以標記物。通過這樣的放大作用，使抗原分子上的標記物大大增多，故間接法較直接法的敏感性大為增高，約高5～10倍，故應用更為廣泛。間接法中較常用的，如過氧化物酶-抗過氧化物酶復合物法(peroxidase anti-peroxidase complexmethod，　標記方法PAP法)，該法除需一抗和二抗外，還需要制備HRP標記的抗酶抗體,即以HRP作為抗原免疫動物，制成抗HRP抗體，再以HRP對標記該抗體，制成穩定的環形PAP復合物。標本先后經一抗、二抗和PAP復合物處理后再以DAB顯色抗原存在部位可見棕黃色產物。　　

免疫細胞化學的發展

近10年來，免疫細胞學技術有了很大進展，各種新方法相繼建立。單克隆抗體 （monoclonal antibody）制備技術極大地提高抗體的特異性與免疫組化染色的精確性。繼PAP法之后由于生物素-親合素等試劑的應用，為檢測微量抗原、受體、抗體提供了更精確的技術。目前常用的生物素-親合方法有:標記親合素-生物素法(labelled avidin-biotin method LAB法)、橋連親合素-生物素法（bridged avidin-biotin method, BAB法)及親素-生物素-過氧化物酶復合物法(avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法)；現市上有配制成的ABC藥盒供應，使用簡便，是目前廣泛應用的一種方法。

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