生物化學(xué)與分子生物學(xué)/DNA重組與基因工程小結(jié)
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基因工程又稱遺傳工程，是生物工程的主導(dǎo)技術(shù)。DNA重組技術(shù)或分子克隆是基因工程的核心。分子生物學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)的許多核酸酶類都可用作基因工程的工具。其中能識別特定的回文序列并切割DNA雙鏈的Ⅱ類限制性核酸內(nèi)切酶在DNA重組技術(shù)中被廣泛應(yīng)用。
當(dāng)前目的基因序列主要來源于自然界的生物，無性繁殖的純基因稱為基因克隆，目的基因或核酸序列必須由載體攜帶進入宿主細(xì)胞復(fù)制繁殖才能分離到克隆。常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體、病毒、酵母人工染色體等，載體必須能攜帶目的序列有效地進入宿主細(xì)胞復(fù)制繁殖，并應(yīng)當(dāng)具有良好的標(biāo)志可供識別和篩選，常用有抗藥性和α互補藍白篩選標(biāo)志等。為獲得目的基因克隆，可構(gòu)建生物的基因組文庫，完整的基因組文庫是含有該生物全部遺傳信息的克隆集合體，從基因組文庫中可以克隆得該生物的基因組基因；以mRNA為模板經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化合成與NRA序列互補的DNA稱為cDNA，可以從組織細(xì)胞提取mRNA構(gòu)建cDNA文庫，完整的cDNA文庫可以獲得特定基因的cDNA構(gòu)隆。目的基因也可以用PCR或人工合成核酸的方法得到，但還離不開從生物基因組和cDNA獲得基因序列知識。要設(shè)計嚴(yán)密的方案，借助工具酶的作用，將目的基因或序列以適當(dāng)?shù)倪B接方式插放載體，用轉(zhuǎn)化、感染或轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入宿主細(xì)胞繁殖，經(jīng)抗藥生長、呈色顯示，核酸分子雜交、PCR、免疫學(xué)親和結(jié)合或限制性酶譜分析等方法篩選獲得克隆，最后要經(jīng)過核酸序列分析鑒定。
克隆的基因可以插入表達載體中帶有宿主細(xì)胞中表達，這是研究目的基因功能和獲取基因產(chǎn)物必需步驟。表達載體應(yīng)當(dāng)具備在宿主細(xì)胞中復(fù)制繁殖、篩選、目的基因插入、以及基因表達所需要的各種元件。大腸桿菌遺傳背景清楚、操作容易、經(jīng)濟、表達水平高，是最常用的表達系統(tǒng)，但它不適用于真核基因組基因的表達并缺乏真核轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯后加工等功能。
DNA重組技術(shù)和基因工程是分子生物學(xué)發(fā)展的突出領(lǐng)域，開創(chuàng)了人類能動改造生物界的新階段，推動了醫(yī)學(xué)和整個生命科學(xué)的進步，為基因診斷、基因治療、基因工程藥物的發(fā)展開辟了道路，是分子生物學(xué)走向廣泛應(yīng)用的重要方面，目前基因工程還只是發(fā)展的初階段，它將依賴于分子生物學(xué)的進步而發(fā)展。
復(fù)習(xí)思考題
1、什么是DNA重組技術(shù)？它包含那些內(nèi)容？
2、列舉常用的基因工程工具酶的特性和用途。
3、敘述常用的基因工程載體的種類、特點和用途。
4、怎樣獲得目的基因或核酸序列的克?。坑心切┓椒?？要經(jīng)過那些基本步驟？
5、怎樣能在大腸桿菌中獲得真核基因的表達產(chǎn)物？
 DNA重組及基因工程技術(shù)對醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)發(fā)展的貢獻 | 細(xì)胞通訊與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機理  |
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