鱟試劑
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鱟的長相既像蝦又像蟹,人稱之為“馬蹄蟹”,是一類與三葉蟲 (現(xiàn)在只有化石)一樣古老的動物?! ?/p>
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種群現(xiàn)狀
鱟的祖先出現(xiàn)在地質(zhì)歷史時期古生代的泥盆紀,當(dāng)時恐龍尚未崛起,原始魚類剛剛問世,隨著時間的推移,與它同時代的動物或者進化、或者滅絕,而惟獨只有鱟從4 億多年前問世至今仍保留其原始而古老的相貌,所以鱟有“活化石”之稱。
生活習(xí)性
每當(dāng)春夏季鱟的繁殖季節(jié),雌雄一旦結(jié)為夫妻,便形影不離,肥大的雌鱟常馱著瘦小的丈夫蹣跚而行。此時捉到一只鱟,提起來便是一對,故鱟享“海底鴛鴦”之美稱?! ?/p>
體形特征
鱟有四只眼睛。頭胸甲前端有0.5毫米的兩只小眼睛, 小眼睛對紫外光最敏感,說明這對眼睛只用來感知亮度。在鱟的頭胸甲兩側(cè)有一對大復(fù)眼,每只眼睛是由若干個小眼睛組成。人們發(fā)現(xiàn)鱟的復(fù)眼有一種側(cè)抑制現(xiàn)象,也就是能使物體的圖像更加清晰,這一原理被應(yīng)用于電視和雷達系統(tǒng)中,提高了電視成像的清晰度和雷達的顯示靈敏度。為此,這種億萬年默默無聞的古老動物一躍而成為近代仿生學(xué)中一顆引人矚目的“明星”?! ?/p>
特殊作用
鱟的血液中含有銅離子,它的血液是藍色的。這種藍色血液的提取物——“鱟試劑”,可以準確、快速地檢測人體內(nèi)部組織是否因細菌感染而致??;在制藥和食品工業(yè)中,可用它對毒素污染進行監(jiān)測。
此外,鱟的肉、卵均可食用。
鱟試劑是從棲生于海洋的節(jié)肢動物“鱟”的蘭色血液中提取變形細胞溶解物,經(jīng)低溫冷凍干燥而成的生物試劑,專用于細菌內(nèi)毒素檢測。目前國際上銷售的鱟試劑有兩種,一種稱美洲鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate),縮寫為LAL,由美國生產(chǎn);另一種稱東方鱟鱟試劑(Tachypleus Amebocyte Lysate),縮寫為TAL。TAL與LAL有相同的功效。
鱟試驗法是國際上至今為止檢測內(nèi)毒素最好的方法,它簡單﹑快速﹑靈敏﹑準確,因而被歐美藥典及我國藥典定為法定內(nèi)毒素檢查法,并已被世界各國所采用。目前能生產(chǎn)鱟試劑的主要有美國、日本、中國等國家。在中國最早生產(chǎn)鱟試劑的廠家有福州東方鱟試劑廠(已倒閉)、廈門鱟試劑廠等。廈門廠鱟試劑榮獲1978-1979年度福建省重大科技成果二等獎,1983年衛(wèi)生部甲級成果獎。目前已有顯色基質(zhì)鱟試劑、凝膠法鱟試劑、特異性鱟試劑及內(nèi)毒素檢測儀器等一系列產(chǎn)品?! ?/p>
實驗方法
鱟試劑按實驗方法可分為: 凝膠法鱟試劑 動態(tài)濁度法鱟試劑 終點濁度法鱟試劑 動態(tài)顯色法鱟試劑 終點顯色法鱟試劑 凝膠法系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。凝膠法鱟試劑常見規(guī)格為0.1ml/支或0.5ml/支或者更大裝量,使用時應(yīng)加除熱原水(細菌內(nèi)毒素檢查用水)復(fù)溶后使用。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應(yīng)的終點。此法操作比較簡單,經(jīng)濟,不需要專用測定設(shè)備,可以進行定性或半定量測定。 特異性鱟試劑,即棄G因子鱟試劑,是國內(nèi)首創(chuàng)的產(chǎn)品, 它專一對內(nèi)毒素起反應(yīng),避免了G因子旁路的干擾,使檢測結(jié)果更加可靠,在藥檢和臨床檢驗方面是不可或缺的理想檢測試劑?!討B(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑,這四種方法都是定量檢測內(nèi)毒素的?!「鶕?jù)檢測原理,終點濁度法和動態(tài)濁度法都屬于濁度法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。終點濁度法未見商品化產(chǎn)品。動態(tài)濁度法(又稱動態(tài)比濁法)是檢測反應(yīng)混合物的濁度上升某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間,或是檢測濁度增加速度的方法。 終點顯色法和動態(tài)顯色法都是屬于顯色基質(zhì)法。顯色基質(zhì)法系利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內(nèi)毒素含量的方法,根據(jù)產(chǎn)物顏色判斷內(nèi)毒素濃度,又稱為比色法。廈門鱟試劑廠于2005年推出以鱟四肽為顯色底物的鱟試劑盒,抗干擾能力強, 靈敏度高達0.005EU/ml, 質(zhì)量達到國際領(lǐng)先水平。目前已有500多家單位使用該試劑盒,并有部分單位發(fā)表相應(yīng)文獻。國內(nèi)有少量國外產(chǎn)品,但價格遠高于國產(chǎn)試劑,到貨周期長?!∪绻鷥H需要檢測樣品的內(nèi)毒素限量,可以選擇凝膠法鱟試劑,通過確定內(nèi)毒素限值及最大有效稀釋倍數(shù),做樣品的干擾試驗從而確定使用的鱟試劑的靈敏度?!∪绻枰繙y定樣品中內(nèi)毒素含量則應(yīng)選擇顯色基質(zhì)鱟試劑盒或動態(tài)濁度法鱟試劑?!討B(tài)濁度法與動態(tài)顯色法需要帶溫育系統(tǒng)的動態(tài)光度測定儀器及配套軟件,例如,微板鱟試儀ELx808及軟件TALgent 或Gen5。動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法簡單方便、一步即成,線性范圍寬?!〗K點顯色法需要配套酶標儀或可見分光光度計進行檢測。配套帶有溫育系統(tǒng)的酶標儀,如微板鱟試儀ELx808,可減少試劑用量。
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