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內(nèi)含子

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內(nèi)含子(introns)是基因內(nèi)的間隔序列,不出現(xiàn)在成熟的RNA分子中,在轉(zhuǎn)錄后通過加工被切除。大多數(shù)真核生物的基因都有內(nèi)含子。需注意的是,在古細(xì)菌中也有內(nèi)含子。

在轉(zhuǎn)錄后的加工中,從最初的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物除去的內(nèi)部的核苷酸序列。術(shù)語(yǔ)內(nèi)含子也指編碼相應(yīng)RNA內(nèi)含子的DNA中的區(qū)域。

大多數(shù)真核結(jié)構(gòu)基因中的間插序列(intervening sequence)或不編碼序列。它們可以轉(zhuǎn)錄,但在基因轉(zhuǎn)錄后,由這些間插序列轉(zhuǎn)錄的部分(也可用內(nèi)含子這個(gè)術(shù)語(yǔ)表示)經(jīng)加工被從初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中準(zhǔn)確除去,才產(chǎn)生有功能的RNA?;虻木幋a部分稱外顯子。內(nèi)含子常比外顯子長(zhǎng),且占基因的更大比例。真核基因所含內(nèi)含子的數(shù)目、位置和長(zhǎng)度不盡相同,如雞卵清蛋白基因的外顯子被7個(gè)內(nèi)含子隔開,雞卵伴清蛋白基因有17個(gè)內(nèi)含子,α-珠蛋白基因有2個(gè)內(nèi)含子,卵粘蛋白基因有6個(gè)內(nèi)含子等。

又稱沉默DNA(silent DNA)。真核基因中的非翻譯區(qū),它不被表達(dá)于蛋白質(zhì)分子或成熟的mRNA中。內(nèi)含子把單個(gè)真核基因分成許多不連續(xù)的區(qū)域。內(nèi)含子也可見于某些前核基因組,但較為少見,且也有許多調(diào)節(jié)功能。由核RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的為不均一核RNA(hnRNA)含有內(nèi)含子,經(jīng)特殊的酶(如ribozyme)作用切去內(nèi)含子序列,然后剩余的外顯子(exon)被連接酶拼接成為成熟的mRNA。但是,還是有少數(shù)被切去的內(nèi)含子可以發(fā)揮酶的作用,催化某些反應(yīng)。  

內(nèi)含子的發(fā)現(xiàn)

1977年國(guó)的Sharp和Roberts兩組科學(xué)家分別同時(shí)發(fā)現(xiàn)了斷裂基因(split gene),Crick稱此為分子遺傳學(xué)上的一次型革命,這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)與1993年榮獲了諾貝爾獎(jiǎng)。

就在Sharp和Roberts發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子之前,法國(guó)的科學(xué)家Chambon也率領(lǐng)一個(gè)小組進(jìn)行了有關(guān)實(shí)驗(yàn)。他們?cè)谒伎家粋€(gè)問題,雞的輸卵管分泌卵清蛋白、卵粘蛋白和伴清蛋白,而其紅細(xì)胞(鳥類的紅細(xì)胞上有核的)只合成血紅蛋白,那么兩種組織之間DNA有什么不同呢?于是他們提取兩種組織的DNA,分別用酶(EcoR1和HindIII)切成幾段,走電泳,再用卵清蛋白mRNA來制備cDNA探針和以上兩片進(jìn)行southern雜交,結(jié)果兩種組織中的DNA不論用哪一種酶來切,都出現(xiàn)了相同的多條陽(yáng)性雜交帶。實(shí)驗(yàn)表明不論是紅細(xì)胞還是輸卵管的細(xì)胞,雖基因表達(dá)不同,但DNA的結(jié)構(gòu)沒有差異。但令它們不解的是cDNA序列內(nèi)并沒有EcoRI和HindIII的切點(diǎn),為什么會(huì)出現(xiàn)多條陽(yáng)性帶。

幾個(gè)月以后Berget,Sharp小組和Roberts小組同時(shí)發(fā)現(xiàn)了腺病毒外殼蛋白六聚體基因(Hexon gene)前導(dǎo)區(qū)有斷裂現(xiàn)象。他們用限制性內(nèi)切酶EcoRI和HindIII分別消解腺病毒的DNA,得到了大小不同的很多片段,分別選擇兩種酶切片段中的最大的A片段DNA和Hexon的mRNA進(jìn)行雜交,在電鏡下可以觀察到EcoRI酶切的A片段的3‘段可以和上述mRNA形成雜合雙鏈,但在雜合雙鏈的5‘端逸出3個(gè)單鏈DNA環(huán),說明它們不能和mDNA完全互補(bǔ)。他們的解釋是Hexon基因5‘端出現(xiàn)了斷裂,即有些區(qū)域在mRNA中已被刪除了,所以出現(xiàn)了不配對(duì)的單鏈環(huán),而HindIII酶切的A片段是Hexon的3‘段區(qū)域,不含有這一斷裂區(qū)域,故不出現(xiàn)單鏈環(huán)。

Berget在冷泉港作了有關(guān)發(fā)現(xiàn)斷裂基因的學(xué)術(shù)報(bào)告,提出在Hexon基因內(nèi)近5‘端有不編碼的部分。Chambon聽了報(bào)告后便意識(shí)到,他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也是可以用斷裂基因來解釋的。即卵清蛋白的基因上可能有多個(gè)斷裂區(qū)(內(nèi)含子)。在這些斷裂區(qū)上有酶切位點(diǎn)的存在,可將卵清蛋白基因切成大小不同的片段,但它們都可以和mRNA進(jìn)行雜交。事后Chambon(1977,1981)等用Berget的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了分子雜交,果然出現(xiàn)了7個(gè)單鏈DNA的環(huán),表面有個(gè)斷裂區(qū)的存在,雖然錯(cuò)過良機(jī),但證實(shí)了自己的推測(cè)仍然是很值得稱贊的事。

1977年繼Sharp和Roberts后相繼發(fā)現(xiàn)了兔子的b珠蛋白基因(Jeffregs.A.J和R.A.Flavell 1977)、鼠的b珠蛋白基因 (Leder P 1978) 和卵清蛋白基因(Chamber 1977)等的斷裂基因。

1978年Gilbort創(chuàng)用了內(nèi)含子 (intro) 和外顯子 (exon) 兩個(gè)名詞,內(nèi)含子是指在成熟的mRNA中不出現(xiàn)的序列Exon是指在成熟的mRNA中出現(xiàn)的編碼序列。

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