臨床生物化學/診斷分子生物學技術的臨床應用

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臨床生物化學

診斷分子生物學基本技術
- 分子生物學實驗基礎
- 分子生物學實驗診斷技術
- 診斷分子生物學技術的臨床應用

一種檢驗方法從建立到臨床應用涉及許多因素，關鍵是臨床需要和質量可靠，結果可信、實用二個面。隨著對發病機制研究的不斷深入，在分子水平診斷、治療、預后疾病已為人們所認識。分子生物學技術一般操作較復雜，成本較高，質控較差，但它在基因分子水平揭示發病的機制及本質、診斷、治療疾病的媚力不可抗拒，人們正在努力改進技術以便符合臨床要求。如PCR技術的出現，立即得到臨床的響應。

一、診斷分子生物學技術應用范圍

外源基因侵入致病，如病毒、細菌、支原體、衣原體、寄生蟲等的傳統檢驗、分類方法效率低，往往不能滿足臨床要求。而外源致病生物侵入體內發病時，拷貝數較高，樣品取材、核酸提取相對容易，加之診斷分子生物學技術的靈敏度與特異性，使臨床應用價值提高。特別是病毒致病日益猖獗，臨床診斷的不斷需要，及應用試劑盒的不斷開發，操作手續的不斷簡化，外源基因的檢驗方法在臨床不斷得到應用。該領域的發展趨勢很可能成為診斷分子生物學技術在臨床應用的突破口，應用前景廣闊。

內源性基因診斷目前在遺傳性疾病診斷方面應用較多，不斷向腫瘤（癌基因）及其它領域深入，尚在數據積累，研究階段。

二、診斷分子生物學技術質量控制

對檢驗技術的具體要求首先是檢驗診斷學的質量保證，由完善、合理的實驗設計來完成。

⒈特異性雜交技術是通過基因克隆制備探針來完成，PCR是通過引物來完成，RFLP是利用限制內切酶來完成等。即探針、引物、限制性內切酶在反應中都具有特異性。

⒉靈敏度雜交技術用同位素或酶標記探針，PCR反復擴增20-30次都是提高靈敏度的手段。二次PCR、PCR與Southern blot合用都是典型的例子。

⒊操作簡單雜交技術因操作復雜且費時（需1-2天以上出結果），在臨床實驗室難以推廣。而PCR方法相對簡單、快速，故推廣迅速。

⒋實驗成本分子生物學實驗因試劑多數依賴進口，成本高，給臨床推廣造成一定的困難。試劑國產化是今后的努力方向。

重復性和穩定性也是我們關心的問題，但報告較少。

本世紀生命科學飛躍發展，尤其是近年來分子生物學新技術日新月異，使過去難以想象的實驗正在進入常規實驗室。以基因結構、基因功能研究為基礎，已深入到醫學研究各領域，在神經分子生物學、腫瘤分子生物學、基因治療等醫學領域做出了引人注目的成績。分子生物學技術、診斷分子生物學（基因診斷）、基因治療已經是醫學工作者不可回避的課題。分子生物學技術理論深，內容多，應用廣。本章只介紹一些基本知識的技術作為入門，更詳盡的內容可參考有關專著和資料。