臨床生物化學/血漿脂蛋白測定

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臨床生物化學

血漿蛋白及其代謝紊亂
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⒈超速離心分離純化法超速離心法是根據血漿中各種脂蛋白的比重（密度）的差異，在強大離心力作用下進行分離純化的一種方法。

血漿在不同密度鹽溶液中經過超速離心，各種脂蛋白可按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質中。脂蛋白漂浮的衡量單位是漂浮率(Sf)。Gofman等于1950年確定，血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中（26℃），每秒達因（ldyn=10^-5N）克離心力的作用下的漂浮速度，稱為1個Svedbery單位（10^-13s）。Sf越大，脂蛋白密度越低。

一般操作方法是將血漿置于已準備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質中，在強大離心作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達到分離純化的目的。

超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術，目前廣泛應用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。

⒉電泳分離法不同脂蛋白因蛋白質含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進行分離，并根據血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠。由于醋酸纖維薄膜要預處理，很繁雜，外加電泳時間過長，目前已很少使用。臨床檢驗中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進行分離，快而較為準確，儀器設備要求不高，被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物分離脂蛋白，值得推薦給臨床使用。

電泳分離法不論用何種支持物，血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進行預染再電泳，電泳完畢，脂蛋白根據電荷量不同，移動在不同的位置，再置于光密度計內進行掃描，計算出各種脂蛋白的百分比，該數值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量，乳糜微粒停留在原點，無法測出其含量，正常空腹12h后，血漿中無CM存在。也可將電泳畢的瓊脂糖凝膠脂蛋白區帶切割置于試管中，加水溶解，進行比色，測出各自百分比，這一手工半定量法無法測準，屬淘汰之列。

⒊沉淀分離法由于脂蛋白的組成及理化性質不同，在不同的聚陰離子和2價不同金屬離子（Mn²⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Ni²⁺、Co²⁺）以及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結合形成復合物沉淀，以達到分離定量各種脂蛋白的目的。

如肝素錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL量，即為血漿HDL的量。也可采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀，再定量沉淀其中的LDL，即血漿的LDL量。脂蛋白是一種既有蛋白質又有膽固醇，還有磷脂的復合體，如何定量，尚無一種較為理想的方法。目前僅以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據，即測定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇，并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）或極低密度脂蛋白-膽固醇（VLDL-C）。這類測定方法是目前臨床廣泛使用的方法，快速并較為準確。

⒋遮蔽直接測定法利用脂蛋白中某種特異抗體等物質，先將血漿中LDL和VLDL包裹保護，不受測定膽固醇試劑的影響，而直接測定未被包裹的HDL中的膽固醇，在不離心分離條件下，測定出HDL的膽固醇含量，快速準確，是近年來發展的新技術，值得推廣應用。