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臨床生物化學

血清酶定量的檢測技術 酶活性測定條件的選擇和限定 底物、輔因子、活化劑、變構劑的種類和濃度 指示酶與輔助酶的種類和濃度 反應體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度 其它影響酶活性因素 溫度的控制

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要了解此問題，應注意溫度對酶活性影響的雙重性。首先，化學速度隨溫度升高而加快，酶反應也不例外。Q₁₀值即溫度增加10℃，化學速度的變化率。酶的Q₁₀值約在1.5-2.5之間。

溫度與反應速度之間關系，可用Arrhenius方程式來表示：

Logk＝－E/2.303RT+常數

式中k是反應常數，T為絕對溫度，R為氣體常數。E為活化能也是常數。在酶反應中V＝K.［E］。所以在酶反應中，LogV和1/T作圖為一直線，斜率為－E/2.303R。通過每一直線斜率不難計算出該酶反應的活化能E。

但是，測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度有可能使酶失活，不同酶在此方面差異很大，有些酶如胎盤堿性磷酸酶在56℃放置15分鐘，活性也不下降，有些酶如酸性磷酸酶，37℃1小時后，失去50％酶活性。酶的穩定性還與其它因素，如作用時間、pH、有無底物、有無其它蛋白等有關。同為堿性磷酸酶，在肝提取液中遠不如血清中穩定，37℃作用15分鐘后肝中此酶活性將顯著下降。又如將血清pH降低在pH6.0以下，血清中酸性磷酸酶將長期穩定。

圖17-5　預溫15分（37℃，pH9.9）對ALP活性的影響

○與●表示肝ALP活性不預溫和預溫的變化

△與▲表示血清ALP活性不預溫和預溫的變化

圖17-5形象說明預溫過程對酶活性的影響。

目前常規工作實驗室越來越多的使用37℃，一些國家已明確推薦使用此溫度。這更多地是從實際工作方便來考慮。因為溫度升高，反應速度快，靈敏度高。同時延滯時間和測定時間都可能縮短。從而有利于提高工作效率。尤其目前在常規實驗室中廣泛使用全自動生化分析儀，有高效率的恒溫系統，使反應系統很快升溫并維持在37℃，可避免溫度差異引起的誤差。但在37℃時，不可避免地一些酶可能失活。

早期曾推薦使用25℃為酶測定溫度，其優點為接近室溫，反應體系溫度很容易平衡到此溫度，這對于當時使用無有效控溫系統的分光光度計來測酶活化性有其特別方便之處。但溫度低。反應太慢。在有些溫熱地區，當室溫超過25℃時，還需使用降溫系統很不方便。因此目前已很少有實驗室采用此溫度。

IFCC推薦的30℃，兼顧了上述二溫度的優點，即保證了一定的反應速度。又無酶失活之擾，此外還有一個上述二溫度沒有的優點，即可以鎵作為此溫度的基準物質，純鎵的熔點為29.77℃。保證了測定系統計30℃的高度準確性，而37℃和25℃至今尚無一個最準確的確定方法。

30℃和37℃是目前使用最廣泛的二種測定酶的使用的溫度。在比較不同實驗室測定結果時，一定要注意由此引起來的差異，否則將導致臨床診斷的困難和誤差。一些作者提出使用二溫度間的轉換系數使二溫度測定結果的比較變為可比。雖然一些作者持懷疑態度，用一個系數能代表所有標本中的變化情況嗎？最新研究證實只要所用方法合適，人類血清中酶對溫度變化的反應差異不大，在無法統一溫度情況下，這還不失為一權宜之計，常用酶的溫度轉換系數可參見表17-4：

表17-4　常見酶溫度轉化系數

	25℃	30℃	37℃
CK	0.64	1.00	1.56
LD	0.75	1.00	1.44
ALT	0.76	1.00	1.38
AST	0.73	1.00	1.52
ALP	0.78	1.00	1.30
GGT	0.73	1.00	1.31
CHE	0.81	1.00	1.26
HBDH	0.85	1.00	1.10

不論選用何種溫度測酶，由于酶反應受溫度影響很大，在測定時間內，反應體系的溫度變化應控制在±0.1℃內。應用國產普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的，應使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。

其它影響酶活性因素 | 測定酶活性濃度的兩大類方法

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